発明情報

背景

DNAのメチル化はエピジェネティック機構の一つであり、胚発生、細胞分化、表現型の差異、様々な疾病などと深く関わっている。現在、DNAメチル化解析のための様々な方法が開発されている中で、特定ゲノム領域のDNAメチル化解析法としてバイサルファイト処理を用いる方法が多用されている。この一つにRRBS(Reduced Representation Bisulfite Sequencing)法があり、メチル化をシングルセルレベルで調べることができる。しかし、シングルセル由来のDNAなどの微量試料のDNAメチル化解析を行う際、バイサルファイト処理によって、DNA試料が断片化し、次工程であるPCR増幅のための十分な量のDNAが供給されないという問題があった。

発明概要と利点

本発明者らは、バイサルファイト処理によって生じるDNA試料の損失を抑制するために、バイサルファイト処理後のDNA試料を一本鎖DNAリガーゼで処理することで、断片化したDNA試料を連結しPCR増幅のための十分な量のDNAを供給できるようになることを発見した。断片化したDNAをレスキューする反応は以下の手順で行う。

　　　1. ビーズへの固定化
　　　2. ホスファターゼ反応
　　　3. キナーゼ反応
　　　4. １本鎖DNAリガーゼ反応